猪瘟试剂盒

猪瘟试剂盒使用说明书

猪瘟试剂盒又称非洲猪瘟检测试剂盒，猪瘟试剂盒适用于猪血液、猪肉组织、淋巴结样本中非洲猪瘟病毒核酸的检测，尤其适用于大型检测机构的高通量快速筛查，提升检测能力。

（快提核酸扩增试剂盒）

【产品名称】

通用名称：猪瘟试剂盒（PCR荧光探针法） 英文名称：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）

［预期用途］

本试剂盒主要用于检测疑似感染猪抗凝血及临床病料中的非洲猪瘟病毒（ASFV,African Swine Fever Virus）核酸，适用于非洲猪瘟病毒的检测、辅助诊断和流行病学调查。

【试剂盒组分】

1、试剂盒组成及贮藏条件

2、需自备材料：生理盐水、无菌枪头、荧光PCR专用反应管、记号笔等。

【操作步骤】一、样品制备

1、血液样品：采集抗凝血（抗凝剂为EDTA）或血清样品，编号备用。

2、组织样品：采集脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体等病变组织样品或软蜱0.1g（黄豆粒大小），眼科剪剪碎于组织匀浆器或研钵中充分匀浆或研磨，再加1mL生理盐水混匀，4°C条件下8000rpm/分钟离心2分钟，取上清液于灭菌离心管中，编号备用。

二、DNA提取

取反应液A 20μL分别加入到新的1.5mL离心管，加入抗凝而或血清或组织上清液2μL混匀，室温（20°C左右）静置3分钟，加入反应液B 20μL,吹打混匀即可，若为抗凝全血，则需8000rpm/分钟再离心2分钟后做为待检DNA溶液。

二、PCR扩增

1、配液：取出PCR反应液、酶混合液，在室温完全融化后，充分混匀，瞬离，可将酶混合液全部取岀直接加入到PCR反应液中，充分混匀，瞬离后按每份20μL分装使用；或按照每份PCR反应液17μL,酶混合液3μL的比例取一定的试验用量，混合两种反应液,瞬离后按照每份20μL分装到专用荧光PCR 反应管中，剩余试剂立即冻存；（操作过程要注意避光）

2、加样扩增：分别向上述PCR反应管中加入5μL样本 DNA或阴性对照或阳性对照，混匀并瞬离,放入荧光PCR仪上运行以下程序：

步骤 条件 循环数 UNG处理 50°C：2分钟1 预变性 95°C：3分钟1 预扩増 95°C：8秒55C：8秒5 PCR扩增 95°C：8秒55°C：8秒40

荧光通道选择FAM,在40循环阶段每个循坏的55°C时收集荧光信号。设置扩增体系为25μL,同时要选择 passive reference 和 quencher 为 none 的模式。

(注:若荧光PCR仪(如ABI7500)按说明书中的反应程序设置后因持温时间短无法运行,可将预扩增和PCR扩增条件变更为95°C：5秒55°C：30秒。)

【结果判定】1、基线和阈值设定；基线调整取6-15个循环的荧光信号，阈值设定以阈值线刚好超过阴性对照检测荧光曲线的最高点为原则。

2、质量控制：反应结束后，阴性对照的检测结果应无特定的扩增曲线，Ct值为＞38或无；阳性对照 的Ct值应≤30.0,且明显的扩增曲线；否则实验视为无效。

3、样品判定：待检样品荧光信号有指数型增加，且结果显示Ct值<35.0,报告为阳性；未检测到Ct 值或Ct值＞38或无明显扩增曲线，则样品判定为阴性。35≤Ct值≤8时，复检一次，重复结果为阳性者判定为阳性，否则判定为阴性。

【注意事项】1、实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行，在操作过程中对时间、试剂体积等精确控制可以获得最好的结果。

2、实验室应严格按照有关规定分区管理。各区间人员、器材、试剂及空气流向应有产格要求。

3、有关耗材确保洁净、无菌，核酸提取完成后尽快进入下一步试验或冷冻保存。

4、预混后的试剂应尽量在短期内使用完毕，户外使用应在加冰袋的泡沫盒保存，每日试验完毕应及时冷冻保存。

5、对于荧光PCR管要避免徒手或使用过的手套接触，检测过程中使用不带荧光物质一次性乳胶手套。

6、冻存试剂使用前应于室温下完全融化，充分混匀，瞬时离心使液体完全沉于管底。

7、样品、阴性对照封盖后，在通风环境添加阳性对照并及时封盖，避免组分间及气溶胶等假阳性污染。

8、扩增反应完毕后的PCR管严禁开盖,应和试验产生的其它废弃物一起及时收集,远离PCR实验室进行无害化处理。

【规格】50头份/盒。

【贮藏与有效期】-20°C以下避光保存，有效期12个月。

仅供兽医诊断使用

猪瘟试剂盒一句话卖点：

猪瘟试剂盒是一款基于PCR荧光探针法的非洲猪瘟病毒核酸检测工具，用于猪血液、组织等样本中ASFV核酸的快速筛查，辅助疫病诊断与流行病学调查。

猪瘟试剂盒常见问题解答

1. 猪瘟试剂盒的检测原理是什么？

本试剂盒采用PCR荧光探针法，通过特异性引物和荧光探针，对样本中的非洲猪瘟病毒（ASFV）核酸进行指数级扩增并实时监测荧光信号。反应过程中，荧光信号强度与扩增产物量成正比，通过仪器检测Ct值判定样本阴阳性。该方法灵敏度高、特异性强，适合大规模筛查。

2. 猪瘟试剂盒适用于哪些样本类型？

试剂盒适用于猪血液（抗凝血或血清）、猪肉组织（脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体等病变组织）以及软蜱样本的非洲猪瘟病毒核酸检测。血液样本需使用EDTA抗凝采集，组织样本需经充分匀浆研磨处理后取上清液进行检测。

3. 猪瘟试剂盒的检测流程需要多长时间？

从样本处理到结果判定，整体检测时间较短。样本DNA提取约需5-10分钟（反应液A+反应液B处理），PCR扩增程序包括UNG处理50°C 2分钟、预变性95°C 3分钟、预扩增及扩增循环约40个循环，总时长通常在1.5小时以内完成。

4. 猪瘟试剂盒的检测结果如何判定？

阴性对照应无扩增曲线、Ct值＞38或无；阳性对照Ct值应≤30.0且扩增曲线明显。待检样品Ct值＜35.0判定为阳性；未检测到Ct值或Ct值＞38判定为阴性；35≤Ct值≤38时需复检，复检阳性则判定为阳性。

5. 猪瘟试剂盒的价格是多少？

该试剂盒产品型号为FT-ZWSJ1，参考价格为700元/盒。每盒规格为50头份，具体采购价格可能因批量采购、经销商政策等因素有所浮动，建议直接向供应商咨询最新报价。

6. 猪瘟试剂盒如何储存和运输？

试剂盒应在-20°C以下避光保存，有效期12个月。运输及户外使用时应使用加冰袋的泡沫盒保存，确保低温环境。冻存试剂使用前需于室温下完全融化、充分混匀并瞬时离心，预混后的试剂应尽量在短期内使用完毕，每日试验完毕应及时冷冻保存。

7. 猪瘟试剂盒操作中需要注意哪些事项？

实验前应仔细阅读说明书，严格按步骤操作。实验室需分区管理，人员、器材、试剂及空气流向应严格规范。避免徒手接触荧光PCR管，使用不带荧光物质的一次性乳胶手套。阳性对照需在通风环境中添加并及时封盖，防止气溶胶污染。扩增后的PCR管严禁开盖，需无害化处理。

8. 猪瘟试剂盒有哪些实际应用案例？

本试剂盒适用于大型检测机构的高通量快速筛查，可有效提升检测能力。主要应用于生猪养殖场、屠宰场、兽医实验室及疾控中心的非洲猪瘟病毒核酸检测、辅助诊断和流行病学调查。试剂盒仅供兽医诊断使用，已在多地畜牧兽医检测体系中推广应用。